BspQI
BspQI dia azo recombinantly aseho amin'ny E. coli izay afaka mamantatra toerana manokana ary novokarina eo ambany
BspQI, endonuclease restriction endonuclease IIs, dia avy amin'ny tadin'ny E. coli recombinant izay mitondra ny gen BspQI klona sy novaina avy amin'ny Bacillus sphaericus.Afaka mamantatra tranonkala manokana izy io, ary toy izao manaraka izao ny filaharan'ny filaharana sy ny fizarazarana:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Endriky ny vokatra
1. Asa avo, fandevonan-kanina haingana;
2. Hetsika kintana ambany, miantoka ny fanapahana marina toy ny "scalpel";
3. Tsy misy BSA ary tsy misy fiaviana biby;
Ny fahatsapana methylation
Dny methylation:Tsy saro-pady;
Dsm methylation:Tsy saro-pady;
CpG methylation:Tsy saro-pady;
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia tokony halefa ≤ 0 ℃;Tehirizo ao amin'ny -25 ~ - 15 ℃ fepetra.
fitahirizana buffer
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500mM KCl, 1.0mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X-100 ary 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
Famaritana vondrona
Ny singa iray dia faritana ho ny habetsahan'ny anzima ilaina mba handevonana 1µg ADN fanaraha-maso anatiny ao anatin'ny adiny 1 amin'ny 50°C amin'ny totalin'ny 50 µL.
Fanaraha-maso kalitao
Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Ny fahadiovan'ny BspQI dia ≥95% nofaritan'ny fanadihadiana SDS-PAGE.
RNase:10U an'ny BspQI miaraka amin'ny 1.6μg MS2 RNA mandritra ny 4 ora amin'ny 50 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
Hetsika DNase tsy voafaritra:10U an'ny BspQI miaraka amin'ny 1μg λ ADN amin'ny 50 ℃ mandritra ny 16 ora, raha ampitahaina amin'ny 50 ℃ mandritra ny 1ora, dia tsy miteraka ADN mihoatra ny ADN araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
Ligation sy Recutting:Aorian'ny fandevonan-kanina ny 1 μg λDNA miaraka amin'ny 10U BspQI, ny sombintsombin'ny ADN dia azo fehezina amin'ny ligase ADN T4 amin'ny 16ºC.Ary ireo sombintsombiny mifamatotra ireo dia azo averina amin'ny BspQI.
E. coli ADN: E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR detection dia nampiseho fa E.coli genome residues ≤ 0.1pg / ul.
Ny sisa tavela amin'ny proteinina:≤ 50 ppm
Bakteria Endotoxine: LAL-test, araka ny fanontana Sinoa Pharmacopoeia IV 2020, fomba fitsapana fetran'ny gel, fitsipika ankapobeny (1143).Ny votoatin'ny endotoxine bakteria dia tokony ho ≤10 EU/mg.
Rafitra fanehoan-kevitra sy fepetra
| singa fototra | BOKY FAHA- |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| ADN | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| d H2O | Hatramin'ny 50 μL |
Fepetra fanehoan-kevitra: 50 ℃, 1~ 16 h.
Famonoana hafanana: 80°C mandritra ny 20 min.
Ny rafitra fanehoan-kevitra sy ny fepetra atolotra dia afaka manome vokatra tsara amin'ny fandevonan-kanina anzima, izay natao ho an'ny fanondroana fotsiny, azafady mba jereo ny valin'ny fanandramana ho an'ny antsipiriany.
Fampiharana vokatra
Famerana ny fandevonan-kanina endonuclease, Cloning haingana.
-tsoratra
1. Ny habetsahan'ny anzima ≤ 1/10 ny habetsahan'ny fanehoan-kevitra.
2. Mety hitranga ny hetsika kintana rehefa mihoatra ny 5% ny fifantohana glycerol.
3. Mety hitranga ny hetsika cleavage rehefa ambany ny tahan'ny substrate.
