DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) dia endodeoxyribonuclease izay afaka mandevona ADN tokana na roa.Izy io dia manaiky sy manapaka ny fatoran'ny phosphodiester mba hamokarana monodeoxynucleotides na oligodeoxynucleotides tokana na roa miaraka amin'ny vondrona phosphate amin'ny terminal 5′ sy hydroxyl amin'ny terminal 3′.Ny asan'ny DNase I dia miankina amin'ny Ca2+ ary azo ampiasaina amin'ny ion metaly divalent toy ny Mn2+ sy Zn2+.Ny 5mM Ca2+ dia miaro ny enzyme amin'ny hydrolysis.Eo anatrehan'ny Mg2+, ny anzima dia afaka mamantatra sy manapaka ny toerana rehetra amin'ny tady ADN rehetra.Amin'ny fisian'ny Mn2+, ny tady roa amin'ny ADN dia azo fantarina sy tapaka amin'ny toerana iray ihany mba hamorona sombin-tsofina ADN amin'ny farany na sombintsombiny ADN mipetaka miaraka amin'ny nucleotides 1-2 mipoitra.
Fananan'ny vokatra
Bovine Pancreas DNase I dia naseho tamin'ny rafitra fanehoana masirasira ary nodiovina.
Components
| singa fototra | BOKY FAHA- | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, tsy misy RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10ml |
| 10 × DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1 mL | 5 × 10ml |
Fitaterana sy fitahirizana
1. Fitahirizana fahamarinan-toerana: - 15 ℃ ~ -25 ℃ ho fitehirizana;
2. Fitantanana ny fitaterana: Fitaterana eo ambanin'ny fonosana gilasy;
3. Atolotra amin'ny: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, glycerol 50%, pH 7.6 amin'ny 25 ℃.
Famaritana vondrona
Ny singa iray dia faritana ho ny habetsahan'ny enzyme izay manimba tanteraka ny 1 µg amin'ny ADN pBR322 ao anatin'ny 10 minitra amin'ny 37 ° C.
Fanaraha-maso kalitao
RNase:5U an'ny DNase I miaraka amin'ny 1.6 μg MS2 RNA mandritra ny 4 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
Bakteria Endotoxine:LAL-test, araka ny fanontana Sinoa Pharmacopoeia IV 2020, fomba fitsapana fetran'ny gel, fitsipika ankapobeny (1143).Ny votoatin'ny endotoxine bakteria dia tokony ho ≤10 EU/mg.
Toromarika momba ny fampiasana
1. Omano ny vahaolana fanehoan-kevitra ao amin'ny fantsona tsy misy RNase araka ny ampahany voalaza etsy ambany:
| singa fototra | BOKY FAHA- |
| ARN | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, tsy misy RNase(5U/μL) | 1 U isaky ny μg RNA |
| ddH2O | Hatramin'ny 10 μL |
2,37 ℃ mandritra ny 15 minitra;
3. Ampio ny buffer famaranana mba hampitsahatra ny fanehoan-kevitra, ary hafanaina amin'ny 65 ℃ mandritra ny 10 minitra mba tsy hampihetsika ny DNase I. Ny santionany dia azo ampiasaina mivantana amin'ny fanandramana fandikana manaraka.
-tsoratra
1. Mampiasà 1U DNase I isaky ny μg an'ny ARN, na 1U DNase I raha latsaky ny 1μg an'ny ARN.
2. Ny EDTA dia tokony ampiana amin'ny fifantohana farany amin'ny 5 mM mba hiarovana ny ARN tsy ho simba mandritra ny tsy fihetsehan'ny enzyme.
