PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F(PNGase F) no fomba enzymatic mahomby indrindra amin'ny fanesorana saika ny oligosaccharides mifandray N rehetra amin'ny glycoproteins.PNGase F dia amidase, izay misaraka eo anelanelan'ny GlcNAc indrindra sy ny sisa tavela amin'ny asparagine amin'ny mannose, hybrid ary oligosaccharides be pitsiny avy amin'ny glycoproteins mifandray amin'ny N.
Fampiharana
Ity enzyme ity dia ilaina amin'ny fanesorana ny sisa tavela amin'ny proteinina.
Fanomanana sy famaritana
| Bika Aman 'endrika | Rano tsy misy loko |
| Fahadiovana proteinina | ≥95% (avy amin'ny SDS-PAGE) |
| asa | ≥500,000 U/mL |
| Exoglycosidase | Tsy misy hetsika hita (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| Protease | ND |
Properties
| laharana EC | 3.5.1.52(Recombinant avy amin'ny microorganism) |
| lanjan'ny molekiola | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric teboka | 8. 14 |
| pH tsara indrindra | 7.0-8.0 |
| Temperature tsara indrindra | 65 °C |
| Substrate specificity | Manapaka fatorana glycosidic eo amin'ny GlcNAc sy ny sisa tavela amin'ny asparagine Fig.1 |
| Toerana fankasitrahana | glycans mifandray N raha tsy misy α1-3 fucose Fig. 2 |
| Activators | DTT |
| Inhibitor | SDS |
| mari-pana fitahirizana | -25 ~-15 ℃ |
| Hafanainactivation | Ny fangaro fanehoan-kevitra 20µL misy 1µL an'ny PNGase F dia tsy mihetsika amin'ny incubation amin'ny 75 ° C mandritra ny 10 minitra. |
Fig. 1 Ny substrate manokana amin'ny PNGase F
Fig. 2 Toerana fankasitrahana ny PNGase F.
Rehefa mifandray amin'ny fucose α1-3 ny sisa tavela amin'ny GlcNAc anatiny, ny PNGase F dia tsy afaka manapaka ny oligosaccharides mifandray amin'ny N amin'ny glycoproteins.Ity fanovana ity dia mahazatra amin'ny zavamaniry sy ny glycoproteins bibikely sasany.
Components
|
| singa | fifantohana |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | 10×Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 µl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
Famaritana vondrona
Ny singa iray (U) dia faritana ho ny habetsahan'ny anzima ilaina hanesorana> 95% ny kôbhydrate amin'ny 10 µg ny RNase B denaturé ao anatin'ny adiny iray amin'ny 37°C amin'ny totalin'ny 10 µL.
Fepetra fanehoan-kevitra
1. Atsaharo ny glycoproteine 1-20 µg amin'ny rano deionized, ampio 1 µl 10 × Glycoprotein Denaturing Buffer sy H2O (raha ilaina) mba hahatonga ny totalin'ny 10 µl.
2.Atsofohy amin'ny 100 ° C mandritra ny 10 minitra, mangatsiaka amin'ny gilasy.
3.Ampio 2 µl 10×GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 ary afangaro.
4.Ampio 1-2 µl PNGase F sy H2O (raha ilaina) mba hahazoana 20 µl ny totalin'ny fihetsiketsehana ary afangaro.
5.Atsofohy amin'ny hafanana 37°C mandritra ny 60 min.
6.Ho an'ny famakafakana SDS-PAGE na famakafakana HPLC.
