Fanombohana mafana Bst 2.0 ADN Polymerase (tsy misy glycerol)
Bst ADN polymerase V2 dia avy amin'ny Bacillus stearothermophilus ADN Polymerase I, izay manana 5′→3′ ADN polymerase hetsika sy mahery fihetsika fanoloana rojo, fa tsy misy 5′→3′ exonuclease hetsika.Ny Bst DNA Polymerase V2 dia mety tsara amin'ny fifindran'ny tady, fanamafisam-peo isothermal LAMP (fanamafisana isothermal Loop mediated) ary filaharana haingana.Bst DNA polymerase V2 dia dikan-teny mafana mifototra amin'ny Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) azo avy amin'ny teknolojia fanovana azo ovaina, izay afaka manakana ny hetsika polymerase ADN amin'ny mari-pana amin'ny efitrano, ka ny rafitra fanehoan-kevitra dia azo ampiasaina sy voavolavola amin'ny mari-pana mba hisorohana ny tsy - Fanamafisana manokana sy fanatsarana ny fahombiazan'ny fanehoan-kevitra, ary ity dikan-teny ity dia azo lyophilized.Ankoatra izany, ny hetsika dia navotsotra amin'ny hafanana avo, noho izany dia tsy ilaina ny dingana fampahavitrihana manokana.
singa
| singa fototra | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ADN polymerase V2 (tsy misy Gliserol)(8U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 mL | 2 × 1,5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1,5 mL | 2 × 1,5 mL | 2 × 10 mL |
Applications
1.LAMP isothermal amplification
2.Fihetseham-po fifindran'ny ADN tokana
3.Fizarana fototarazo GC avo
4.ADN sequencing ny nanogram haavon'ny.
Toetra fitahirizana
Fitaterana eo ambanin'ny 0 ° C ary tehirizina amin'ny -25 ° C ~ -15 ° C.
Famaritana vondrona
Ny singa iray dia voafaritra ho ny habetsahan'ny anzima izay mampiditra 25 nmol dNTP ho akora tsy mety levona asidra ao anatin'ny 30 minitra amin'ny 65 ° C.
Fanaraha-maso kalitao
1.Fandinihana ny fahadiovan'ny proteinina (SDS-PAGE):Ny fahadiovan'ny Bst DNA polymerase V2 dia ≥99% voafaritry ny fanadihadiana SDS-PAGE amin'ny fampiasana ny Coomassie Blue detection.
2.Endonucleaseasa:Ny fampidirana fanehoan-kevitra 50 μL misy 8 U Bst ADN polymerase V2 farafahakeliny miaraka amin'ny 1 μg λDNA mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka izay voafaritra.
3.Exonuclease Activity:Ny fikorianan'ny fanehoan-kevitra 50 μL misy 8 U kely indrindra amin'ny Bst DNA polymerase V2 miaraka amin'ny 1 μg λ -Hind Ⅲ mandevona ADN mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana hita maso araka ny voafaritra.
4.Nickase Activity:Ny fampidirana fanehoan-kevitra 50 μL misy 8 U farafahakeliny amin'ny Bst DNA polymerase V2 miaraka amin'ny 1 μg pBR322 ADN mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ° C dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka izay voafaritra.
5.RNase Activity:Ny fampidirana fanehoan-kevitra 50 μL misy 8 U kely indrindra amin'ny Bst DNA polymerase V2 miaraka amin'ny 1.6 μg MS2 RNA mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ° C dia tsy miteraka fahasimbana hita maso araka izay voafaritra.
6.E. coliADN:Ny 120 U an'ny Bst DNA polymerase V2 dia voasivana amin'ny fisian'ny ADN génomika E. coli amin'ny fampiasana TaqMan qPCR miaraka amin'ny primer manokana ho an'ny toerana E. coli 16S rRNA.Ny fandotoana ADN génomika E. coli dia ≤1 Kopia.
LAMP Reaction
| singa | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μl |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (10mM tsirairay) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Maitso (25×)a | 1,0 μL |
| Fangaro voalohanyb | 6 μL |
| Bst ADN Polymerase V2 (tsy misy Gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Endrika | × μL |
| ddH₂O | Hatramin'ny 25 μL |
Fanamarihana:
1) a.SYTOTM 16 Maitso (25×): Araka ny filàna andrana dia azo ampiasaina ho solon’ny loko hafa;
2) b.Fangaro voalohany: azo amin'ny fampifangaroana 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ary boky hafa.
Fihetseham-po sy fepetra
1 × HC Bst V2 Buffer, ny mari-pana incubation dia eo anelanelan'ny 60°C sy 65°C.
Hafanainactivation
80°C, 20 min
