Robusstart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase dia polymerase ADN manomboka mafana.Ity vokatra ity dia tsy vitan'ny hoe manakana tsara kokoa ny fanehoan-kevitra tsy voafaritra nateraky ny fanonganana tsy voafaritra ny primers na ny fanangonana primer amin'ny dingan'ny fanomanana sy ny fanamafisana ny rafitra PCR.Noho izany, dia manana specificity tena tsara ary mahomby kokoa ho an'ny amplification ny ambany fifantohana template, ary mety ho multiplexed PCR amplification fanehoan-kevitra.Ankoatr'izay, ity vokatra ity dia tena azo ampiharina tsara, ary azo alaina amin'ny karazana fanehoan-kevitra PCR isan-karazany ny valin'ny fanamafisana maharitra.
singa
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ maimaim-poana) (tsy voatery)
3.25 mM MgCl2(tsy voatery)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ maimaim-poana) tsy misy dNTP sy Mg²+, azafady ampio dNTP sy MgCl2rehefa manomana ny rafitra fanehoan-kevitra.
Fampiharana naroso
1.Fanamafisana haingana.
2.Fanamafisana marobe.
3.Fanamafisana mivantana ny ra, swab ary santionany hafa.
4.Famantarana ny aretin'ny taovam-pisefoana.
Toetra fitahirizana
-20°C ho an'ny fitehirizana maharitra, tokony afangaro tsara alohan'ny fampiasana, fadio ny fanala matetika.
* Raha misy rotsak'orana aorian'ny vata fampangatsiahana dia ara-dalàna izany;izany no nanolorana azy ho equilibrate amin`ny mari-pana ny efitra alohan`ny fampifangaroana sy ny fampiasana.
Famaritana vondrona
Ny singa mavitrika iray (U) dia faritana ho ny habetsahan'ny anzima izay mampiditra 10 nmol deoxyribonucleotide ho akora tsy mety levona amin'ny asidra amin'ny 74 ° C mandritra ny 30 minitra amin'ny fampiasana ADN tsirinaina salmon mavitrika ho modely / prime.
Fanaraha-maso kalitao
1.Ny fahadiovana electrophoretic SDS-PAGE mihoatra ny 98%.
2.Fanamafisana fahatsapana, batch-to-batch fanaraha-maso, fahamarinan-toerana.
3.Tsy misy hetsika nuclease exogenous, tsy misy endonuclease exogenous na fandotoana exonuclease
torolalana
Fametrahana fanehoan-kevitra
| singa | Volume (μL) | Fifantohana farany |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ maimaim-poana)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM isaky ny dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Fangaro voalohanyamin ' | 2 | 1× |
| Endrika | - | < 1 μg / fanehoan-kevitra |
| ddH2O | To 50 | - |
Fanamarihana:
1) a.Tsy misy dNTP sy Mg²+ ny buffer, ampio dNTP sy MgCl azafady2rehefa manomana ny rafitra fanehoan-kevitra.
2) b.Raha ampiasaina amin'ny qPCR/qRT-PCR, dia tokony hampidirina ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra ny probe fluorescent.Matetika, ny fifantohana primer farany amin'ny 0,2 μM dia hanome vokatra tsara;raha ratsy ny fampisehoana fanehoan-kevitra, ny fifantohana primer dia azo ahitsy amin'ny 0.2-1 μM.Ny fifantohan'ny probe dia matetika optimized amin'ny isan-karazany ny 0.1-0.3 μM.Ny andrana gradient concentration dia azo atao mba hahitana ny fitambaran'ny primer sy probe tsara indrindra.
Thermal cycling protocole
| PCR mahazatraDINGANA | |||
| Dingana | hafanana | Time | tsingerina |
| Pre-denaturation | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10-20 seg | 40-50 |
| Fanitarana / fanitarana | 56-64 ℃ | 20-60 seg | |
| PCR hainganaDINGANA | |||
| Dingana | hafanana | Time | tsingerina |
| Pre-denaturation | 95 ℃ | 30 seg | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 1-5 seg | 40-45 |
| Fanitarana / fanitarana | 56-64 ℃ | 5-20 seg | |
-tsoratra
1.Ny tahan'ny amplification ny ADN polymerase haingana dia tsy tokony ho latsaky ny 1 kb/10 s.Ny fiakaran'ny mari-pana sy ny fianjerana, ny fomba fanaraha-maso ny mari-pana ary ny fahombiazan'ny fampitana hafanana amin'ny fitaovana PCR samihafa dia miovaova be, noho izany dia soso-kevitra ny hanatsara ny fepetra fanehoan-kevitra tsara indrindra ho an'ny fitaovana PCR haingana.
2.Ny rafitra dia tena azo ampifanarahana, miaraka amin'ny mari-pahaizana ambony kokoa sy ny fahatsapana.
3.Mety amin'ny fampiasana ho toy ny reagents detection PCR avo lenta, ary azo ampiasaina amin'ny fanehoan-kevitra fanamafisana PCR multiplex.
4.5′→3′ polymerase, 5′→3′ exonuclease;tsy misy hetsika exonuclease 3′→5′;tsy misy proofreading function.
5.Mety amin'ny fitiliana qualitative sy quantitative amin'ny PCR sy RT-PCR.
6.Ny faran'ny 3′ amin'ny vokatra PCR dia A, izay azo alaina mivantana amin'ny vector T.
7.Ny fomba telo-dingana dia atolotra ho an'ny primer miaraka amin'ny mari-pana ambany kokoa na amin'ny fanamafisana ny sombintsombiny mihoatra ny 200 bp.
