2×PCR Master Mix (tsy misy loko)
PCR Master Mix dia karazana vahaolana PCR premixed mahazatra izay vonona hampiasaina, ao anatin'izany ny Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 ary buffer optimized.Mandritra ny fanehoan-kevitra, ny primer sy ny môdely ihany no azo ampiana ho fanamafisana, izay manamora ny fizotran'ny fanandramana.Ity vokatra ity dia misy stabilizer tsara ary azo tehirizina mandritra ny 3 volana amin'ny 4 ℃.Ny vokatra PCR dia manana 3′-dA protrusion ary azo alaina mora amin'ny T vector.
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia tokony hotehirizina amin'ny -25 ℃ ~ -15 ℃ mandritra ny roa taona.
fepetra arahana
| Fidelity (vs.Taq) | 1× |
| Manomboka mafana | No |
| Overhang | 3′-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Fomba fanehoan-kevitra | SuperMix na Master Mix |
| Hafainganam-pandrenesana | Malagasy |
| Karazana vokatra | PCR Master Mix (2×) |
torolalana
1.Reaction System
| singa | Habe (μL) |
| ADN template | mety |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | To 50 |
2.Amplification Protocol
| Dingana tsingerina | Temperature (°C) | Time | tsingerina |
| Pre-denaturation | 94 ℃ | 5 mn | 1 |
| Denaturation | 94 ℃ | 30 seg | 35 |
| Fanafody | 50-60 ℃ | 30 seg | |
| Fanitarana | 72 ℃ | 30-60 sec/kb | |
| Fanitarana farany | 72 ℃ | 10 mn | 1 |
Fanamarihana:
1) Fampiasana môdely: 50-200 ng ADN génomika;0.1-10 ng plasmid ADN.
2) Mg2+fifantohana: Ity vokatra ity dia misy 3 mM MgCl2 mety amin'ny ankamaroan'ny fanehoan-kevitra PCR.
3) Ny mari-pana fanalefahana: Azafady, jereo ny sandan'ny Tm amin'ny Primers.Ny mari-pana annealing dia azo apetraka amin'ny 2-5 ℃ ambany noho ny sanda ara-teorika ny primer.
4) Fotoana fanitarana: Ho an'ny famantarana molekiola, 30 sec/kb no soso-kevitra.Ho an'ny fakàna ny fototarazo, 60sec/kb no soso-kevitra.
-tsoratra
1.Mba hiarovanao sy ny fahasalamanao, miangavy anao hanao akanjo laboratoara sy fonon-tanana azo ampiasaina.
2.Fampiasana fikarohana ihany!
