2×PCR Super Mix (miaraka amin'ny loko)
2× PCR Master Mix dia misy Taq DNA Polymerase, dNTPs, ary singa ilaina PCR hafa.Ny Master Mix dia miorina mandritra ny 3 volana amin'ny 4 ℃ miaraka amin'ireo stabilisateur namboarinay.Ny vahaolana mialoha ny fangaro dia natao ho an'ny PCR mahazatra ary vonona hampiasaina amin'ny alàlan'ny fampidirana ny môdely ADN sy ny primers.Ny vokatra PCR dia azo entina mivantana ho an'ny electrophoresis miaraka amin'ny loko manga bromophenol efa feno.Ny vokatra amplified dia misy 3'-dA protrusion ary azo alaina mora amin'ny T vector.Ny 2×PCR Master Mix dia manatsotra ny fomba PCR ary mampihena ny loto.
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia tokony hotehirizina amin'ny -25 ℃ ~ -15 ℃ mandritra ny 2 taona.
fepetra arahana
| Fidelity(vs.Taq) | 1× |
| Manomboka mafana | No |
| Overhang | 3'-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Fomba fanehoan-kevitra | SuperMix na Master Mix |
| Hafainganam-pandrenesana | Malagasy |
| Karazana vokatra | PCR Master Mix (2x) |
torolalana
1.Reaction System
| singa | BOKY FAHA-(μL) |
| ADN template | mety |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| 2 × PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | ny 50 |
2.Amplification Protocol
| Dingana tsingerina | Temperature (°C) | Time | tsingerina |
| Denaturation voalohany | 94 | 5 min | 1 |
| Denaturation | 94 | 30 seg | 35 |
| Fanafody | 50-60 | 30 seg | |
| Fanitarana | 72 | 30-60 seg/kb | |
| Fanitarana farany | 72 | 10 min | 1 |
Fanamarihana:
1) Fampiasana môdely: ADN génomika 50-200ng;ADN plasmid 0.1-10ng.
2) Mg2+fifantohana: Ity vokatra ity dia misy 3mM MgCl2, mety amin'ny ankamaroan'ny fanehoan-kevitra PCR.
3) Ny mari-pana fanalefahana: Azafady, jereo ny sandan'ny Tm teorika amin'ny primers.Ny mari-pana annealing dia azo apetraka amin'ny 2-5 ℃ ambany noho ny sanda ara-teorika ny primer.
4) Fotoana fanitarana: Ho an'ny famantarana molekiola, 30 sec/kb no soso-kevitra.Ho an'ny fakàna fototarazo, 60 sec/kb no atolotra.
-tsoratra
1.Ny vokatra PCR misy 2 × PCR Master Mix dia tsy mety amin'ny electrophoresis gel polyacrylamide.
2.Mba hiarovanao sy ny fahasalamanao, miangavy anao hanao akanjo laboratoara sy fonon-tanana azo ampiasaina.
3.Ampiasaina amin'ny fampiasana fikarohana IHANY!
