Multiplex qPCR Probe Premix
Ampahany : HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) dia vahaolana mialoha ho an'ny fanamafisam-peo PCR 2 × tena misy amin'ny fotoana misy ny fahatsapan-tena sy ny maha-tokana azy, izay miloko manga, ary misy fiantraikany amin'ny santionany fanampiny.Ity vokatra ity dia reagent 2× Mix efa voafangaro izay mamela ny fanehoan-kevitra PCR fluorescent quantitative efatra amin'ny fanehoan-kevitra tokana.Ity vokatra ity dia misy fomba fiasa antibody novaina ho an'ny anzima Taq manomboka mafana, manatsara ny fahatsapan-tena sy ny maha-tokana azy.Mandritra izany fotoana izany, ity vokatra ity dia nanatsara lalina ny buffer multi-reaksi, izay afaka manatsara ny fahombiazan'ny fampitomboana ny fanehoan-kevitra ary mampiroborobo ny fanamafisana mahomby amin'ny maodely misy fifantohana ambany.Ity vokatra ity dia azo ampiasaina amin'ny genotyping sy famakafakana quantitative multiplex.
famaritana
| Manomboka mafana | Naorina-in mafana fanombohana |
| Fomba fitadiavana | Famantarana ny primer-probe |
| PCR fomba | qPCR |
| Polymerase | Taq ADN polymerase |
| Karazana santionany | ADN |
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia alefa miaraka amin'ny ranomandry maina ary azo tehirizina amin'ny -25 ~ -15 ℃ mandritra ny 2 taona.
torolalana
1. Fihetseham-poRAFITRA
| singa | Vola (μL) | Fifantohana farany |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Fangaro voalohany (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Fangaro fangaro (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox reference loko | 0.5 | 1× |
| Modely ADN/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | hatramin'ny 25 | - |
Fanamarihana:Afangaro tsara alohan'ny hampiasana mba hisorohana ny bubbles be loatra amin'ny fihozongozonana mafy.
a.Fiarahan'ny voalohany: Ny fangaro voalohany dia misy primera maromaro tsiroaroa, matetika ny primer tsirairay amin'ny fifantohana farany 0.2 μmol/L ary azo amboarina eo anelanelan'ny 0.1 sy 0.5 μmol/L koa raha mety.
b.Ny fifantohana amin'ny probe: Ny Probe Mix dia misy probe maromaro miaraka amin'ny mari-pamantarana fluorescence samihafa, ary ny fifantohan'ny probe tsirairay dia azo amboarina eo anelanelan'ny 50 sy 250 nmol / L araka ny toe-javatra manokana.
1.Rox loko fanondro: Izany dia ampiasaina amin'ny Real Time PCR fitaovana fanamafisam-peo toy ny Applied Biosystems hanitsy ny fahadisoana ny fluorescence famantarana vokarina eo anelanelan'ny lavadrano;Ity vokatra ity dia tsy misy reference amin'ny loko Rox.Cas#10200 no soso-kevitra raha ilaina.
2.Fandotoana ny maodely: saro-pady be ny qPCR, ary asaina manalefaka ilay môdely hampiasaina.Raha vahaolana tahiry cDNA ny môdely, dia tsy tokony hihoatra ny 1/10 amin'ny totalin'ny volan'ny môdely.
3.Rafitra fanehoan-kevitra: 25μL, 30μL na 50μL no soso-kevitra mba hiantohana ny fahombiazan'ny sy ny fiverimberenan'ny fanamafisana ny fototarazo kendrena.
4.Fiomanana rafitra: Miomàna ao amin'ny dabilio tena madio, ary ampiasao ny toro-hevitra sy ny fantsona fanehoan-kevitra tsy misy sisa tavela;izany no nanolorana azy ho mampiasa ny toro-hevitra amin`ny sivana cartridges.Fadio ny fandotoana miampita sy ny fandotoana aerosol.
2.Programa fanehoan-kevitra
| Dingana tsingerina | Temp. | Time | tsingerina |
| Denaturation voalohany | 95 ℃ | 5 mn | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 15 seg | 45 |
| Fanitarana / fanitarana | 60 ℃ | 30 seg |
Fanamarihana:
1.Fanitarana / fanitarana: Ny mari-pana sy ny fotoana dia azo amboarina araka ny tokony ho izy araka ny sanda Tm voalohany natao.
2.Fitrandrahana famantarana ny fluorescence: Ny fotoana fahazoana famantarana ny fluorescence ilaina amin'ny fitaovana fitiliana qPCR samihafa dia hafa, azafady apetraho araka ny fe-potoana farany ambany indrindra.Ny fotoanan'ny fitaovana mahazatra maromaro dia apetraka toy izao manaraka izao:
20 seg: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 seg: Applied Biosystems 7300
32 seg: Applied Biosystems 7500
-tsoratra
Azafady, ataovy ny PPE ilaina, akanjo laboratoara sy fonon-tanana, mba hiantohana ny fahasalamanao sy ny fiarovana anao!
