2×Rapid Taq Super Mix
Saka No: HCR2016A
2×Rapid Taq Super Mix dia mifototra amin'ny Taq DNA Polymerase novaina, manampy ny fanitarana matanjaka, ny fanamafisana ny fanamafisana ary ny rafitra buffer optimized, miaraka amin'ny fahombiazan'ny fanamafisana avo lenta.Ny hafainganan'ny fampitomboana ny maodely sarotra toy ny génome ao anatin'ny 3 kb dia mahatratra 1-3 sec/kb, ary ny an'ny template tsotra toy ny plasmids ao anatin'ny 5 kb dia mahatratra 1 sec/kb.Ity vokatra ity dia afaka mamonjy be ny fotoana fanehoan-kevitry ny PCR.Mandritra izany fotoana izany, ny fifangaroana dia misy dNTP sy Mg2+, izay tsy azo ampitomboina afa-tsy amin'ny fampidirana primers sy templates, izay manamora ny fizotran'ny fanandramana.Ankoatr'izay, ny fangaro dia misy loko fanondro electrophoretic, izay mety ho electrophoresis mivantana aorian'ny fanehoan-kevitra.Ny mpiasan'ny fiarovana amin'ity vokatra ity dia mahatonga ny fifangaroana hihazona ny hetsika marin-toerana aorian'ny fanamainana miverimberina sy ny fandoroana.Ny tarika 3'-end A amin'ny vokatra PCR dia azo alaina mora foana amin'ny T vector.
singa
2×Rapid Taq Super Mix
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra PCR Master Mix dia tokony hotehirizina amin'ny -25 ~ -15 ℃ mandritra ny 2 taona.
fepetra arahana
| Famaritana ny vokatra | Rapid Taq Super Mix |
| fifantohana | 2× |
| Manomboka mafana | Naorina-in Hot Start |
| Overhang | 3′-A |
| Hafainganam-pandrenesana | Rapid |
| Habe (vokatra farany) | Hatramin'ny 15 kb |
| Fepetra momba ny fitaterana | gilasy maina |
torolalana
1. Rafitra fanehoan-kevitra (50 μL)
| singa | Habe (μL) |
| Modely ADN* | mety |
| Voalohany aloha (10 μmol/L) | 2.5 |
| Primer mivadika (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×Rapid Taq Super Mix | 25 |
| ddH2O | ny 50 |
2.Amplification Protocol
| Dingana tsingerina | Temperature (°C) | Time | tsingerina |
| Predenaturation | 94 | 3 min | 1 |
| Denaturation | 94 | 10 seg |
28-35 |
| Fanafody | 60 | 20 seg | |
| Fanitarana | 72 | 1-10 seg/kb |
Fampiasana modely samihafa:
| Karazana môdely | Fampiasana fizarana (rafitra fanehoan-kevitra 50 μL) |
| ADN génomika na ranon-javatra E. coli | 10–1,000 ng |
| Plasmid na ADN viral | 0,5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (tsy mihoatra ny 1/10 amin'ny totalin'ny fihetsiketsehana PCR) |
| Fampiasana modely samihafa | |
Fanamarihana:
1.Fampiasana reagent: levona tanteraka ary afangaro alohan'ny fampiasana.
2. Ny mari-pana annealing: Ny mari-pana annealing dia ny sanda Tm manerantany, ary azo apetraka ihany koa ny 1-2 ℃ ambany noho ny sanda Tm voalohany.
3. Hafainganam-pandrosoana: Mametraka 1 sec/kb ho an'ny maodely sarotra toy ny génome sy E. coli ao anatin'ny 1 kb;mametraka 3 sec/kb ho an'ny môdely sarotra toy ny genome 1-3 kb sy E. coli;mametraka 10 sec/kb ho an'ny môdely sarotra mihoatra ny 3 kb genome sy E. coli.Azonao atao ny mametraka ny sanda ho 1 sec/kb ho an'ny môdely tsotra toy ny plasmid latsaky ny 5 kb, 5 sec/kb ho an'ny môdely tsotra toy ny plasmid eo anelanelan'ny 5 sy 10 kb, ary 10 sec/kb ho an'ny môdely tsotra. toy ny plasmid lehibe kokoa noho ny 10 kb.
-tsoratra
1. Mba hiarovanao sy ny fahasalamanao, miangavy anao hanao akanjo laboratoara sy fonon-tanana fanariana ho an'ny fandidiana.
2. Ity vokatra ity dia natao ho an'ny fikarohana IHANY!
