Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) dia polypeptide tokana misy tady disulfide 4 miaraka amin'ny lanjan'ny molekiola manodidina ny 13,7 kDa.Ny RNase A dia endoribonuclease izay manimba manokana ny ARN tokana amin'ny sisa tavela C sy U.Amin'ny ankapobeny, ny cleavage dia manaiky ny fifamatorana phosphodiester noforonin'ny 5′-ribose amin'ny nucleotide sy ny vondrona phosphate amin'ny 3′-ribose amin'ny nucleotide pyrimidine mifanakaiky, ka ny 2, 3'-cyclic phosphates dia hydrolyzed amin'ny 3 mifanaraka amin'izany. phosphate nucleoside (ohatra ny pG-pG-pC-pA-pG dia notapatapahin'ny RNase A mba hamokarana pG-pG-pCp sy A-PG).Ny RNase A no mavitrika indrindra amin'ny famafazana RNA tokana.Recommended miasa fifantohana dia 1-100μG/mL, mifanaraka amin'ny rafitra fanehoan-kevitra isan-karazany.Ny fatran'ny sira ambany (0-100 mM NaCl) dia azo ampiasaina hanapahana ny RNA tokana, RNA roa, ary ny rojo RNA noforonin'ny hybridization RNA-ADN.Na izany aza, amin'ny habetsahan'ny sira (≥0.3 M), ny RNase A dia manapaka manokana ny ARN tokana.
Ny RNase A dia matetika ampiasaina hanesorana ny RNA mandritra ny fanomanana ny ADN plasmid na ny ADN génomika. Na mavitrika na tsia ny DNase mandritra ny dingana fanomanana dia mety hisy fiantraikany mora amin'ny fanehoan-kevitra.Ny fomba nentim-paharazana amin'ny fandrahoan-drano ao anaty rano fandroana dia azo ampiasaina hanesorana ny hetsika DNase.Ity vokatra ity dia tsy misy DNase sy protease, ary tsy mila fitsaboana hafanana alohan'ny fampiasana azy.Ankoatr'izay, ity vokatra ity dia azo ampiasaina amin'ny andrana biolojia molekiola toy ny famakafakana fiarovana amin'ny RNase sy ny famakafakana ny filaharan'ny RNA.
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia azo tehirizina amin'ny -25～-15 ℃, manan-kery mandritra ny 2 taona.
torolalana
Io no iray amin'ireo fomba mahazatra amin'ny fanomanana vahaolana fitahirizana RNase A.Azo omanina amin'nyfomba hafa araka ny fomba nentim-paharazana ao amin'ny laboratoara na boky fanondroana (toy nylevona mivantana amin'ny 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 na vahaolana Tris-NaCl)
1. Mampiasà acetate sodium 10 mM (pH 5.2) hanomanana vahaolana fitehirizana RNase A 10 mg/mL
2. Fafana amin'ny 100 ℃ mandritra ny 15 min
3. Mangatsiaka amin'ny mari-pana ao amin'ny efitrano, ampio 1/10 volume amin'ny 1 M Tris-HCl (pH 7.4), amboary ny pH azy ho 7.4 (ho an'nyOhatra, ampio 500 ml ny 10g/ml RNase fitehirizana vahaolana 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-packaged amin'ny -20 ℃ ho an'ny fitahirizana mangatsiaka, izay mety maharitra hatramin'ny 2 taona.
[Fanamarihana]: Rehefa mangotraka ny vahaolana RNaseA amin'ny toe-javatra tsy miandany, dia hiforona ny rotsak'orana RNase;Andrahoina amin'ny pH ambany, ary raha misy rotsak'orana dia azo jerena, izay mety ho vokatry ny fisian'ny loto proteinina.Raha misy antsanga hita rehefa avy mangotraka, dia azo esorina amin'ny alàlan'ny centrifugation haingana (13000rpm) ny loto, ary avy eo dia fenoina ho an'ny fitehirizana mangatsiaka.
Fampahafantarana momba ny vokatra
| Synonymes | Ribonuclease I;ribonuclease pancreatic;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Bika Aman 'endrika | Vovoka fotsy lyophilized |
| lanjan'ny molekiola | ~ 13.7kDa (fitsipika amino asidra) |
| Sanda Ph | 7.6 (asa isan-karazany 6-10) |
| Temperature mety | 60 ℃ (15-70 ℃) |
| Agent activité | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase Inhibitor |
| Fomba inactivation | Tsy afaka inactivated amin'ny alalan'ny fanafanana, dia soso-kevitra ny mampiasa tsanganana centrifuge |
| LASA | omby |
| Solubility | Mety levona anaty rano (10mg/ml) |
| Fatiantoka amin'ny maina | ≤5.0% |
| Hetsika enzyme | ≥60 unit Kunitz/mg |
| Isoelectric teboka | 9.6 |
-tsoratra
Mba hiarovanao sy ny fahasalamanao, miangavy anao hanao akanjo laboratoara sy fonon-tanana azo ampiasaina.
