Multiplex dingana iray RT-qPCR Premix-UNG
Ampahany : HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) dia kitapo PCR maromaro mifototra amin'ny RNA ho maodely.Nandritra ny dingan'ny fanandramana dia natao tao anaty fantsona iray ihany ny transcription mivadika sy ny PCR quantitative, izay nanatsotra ny asa fanandramana ary nampihena ny mety hisian'ny loto.Ao anatin'ity kitapo ity, ny cDNA voalohany dia novolavolaina tsara tamin'ny alàlan'ny Reverse Transcriptase mahatohitra hafanana ary nohamafisin'ny HotStart Tag DNA Polymerase.Ny kitapo dia ahitana ny buffer MP tsara indrindra, ny fangaro enzymes, sns. Ny vahaolana buffer dia efa misy Mg2+sy dNTP.Ankoatr'izay, ireo lafin-javatra izay afaka manakana tsara ny PCR tsy voafaritra manokana ary manatsara ny fahombiazan'ny fanamafisana ny fanehoan-kevitra qPCR maro dia ampiana, izay afaka miantoka ny fahombiazan'ny amplification ary manatanteraka ny fanehoan-kevitry ny amplification marobe.Nampiana ny rafitra dUTP/UDG mba hisorohana ny mety hisian'ny fandotoana aerosol.
singa
1. Buffer
2. Enzyme Mix
famaritana
| Manomboka mafana | Naorina-in mafana fanombohana |
| Fomba fitadiavana | Famantarana ny primer-probe |
| PCR fomba | Dingana iray RT-qPCR |
| Polymerase | Taq ADN polymerase |
| Karazana santionany | ADN |
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia alefa miaraka amin'ny ranomandry maina ary azo tehirizina amin'ny -25 ~ -15 ℃ mandritra ny 1 taona.Tokony hialana matetika izanymivaingana-thaw.Aroso ny mitahiry misaraka.
torolalana
1.fanehoan-kevitra RAFITRA
| singa | Vola (μL) | Fifantohana farany |
| 2 × MP buffer | 12.5 | 1× |
| Enzyme Mix | 1 | - |
| Fangaro voalohany/Probe (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | ho 25 | - |
Fanamarihana:
Ataovy azo antoka fa afangaro tsara alohan'ny hampiasana azy, fadio ny miboiboika be loatra vokatry ny vibration mahery vaika.
a.Primary fifantohana: Primer mifangaro anisan'izany ny multiplex primer, miankina amin'ny toe-javatra tsara indrindra primer concentration mety eo anelanelan'ny 0.l sy 1.0μM.
b.Fanadihadiana fifantohana: Probe fifangaroana anisan'izany ny multiplex probe fametahana marika ny fahasamihafana fluorescent vondrona, miankina amin'ny toe-javatra tsara indrindra probe fifantohana mety eo anelanelan'ny 0.05 sy 0.5μM.
c.Fandotoana ny maodely: saro-pady be ny qPCR ary asaina manalefaka ilay môdely.Ny sanda Ct fanaraha-maso dia mety eo anelanelan'ny 20 sy 35.
d.Fiomanana rafitra: Miomàna ao amin'ny latabatra miasa tena madio, ary pipettor sy fanehoan-kevitra fantsona tsy misy nuclease sisa;izany no nanolorana azy ho mampiasa ny basy lohany amin`ny sivana singa.Fadio ny fandotoana miampita sy ny fandotoana aerosol.
2. Optimized bisikiletafifanarahana
| tsingerin'ny dingana | Temp. | Time | tsingerina |
| Mivadika transcription | 50 ℃ny | 20 mn | 1 |
| Denaturation voalohany | 95 ℃ | 5 mn | 1 |
| fanehoan-kevitra amplification | 95 ℃ | 15 seg |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 seg c |
Fanamarihana:
a.Mivadika transcription: Ny mari-pana dia afaka misafidy 42°C na 50°C.
b.Fihetseham-po fanamafisam-peo: Ny mari-pana dia amboarina araka ny sandan'ny Tm an'ireo primer namboarina.
c.Fitrandrahana famantarana ny fluorescence: Apetraho azafady ny fomba fanandramana araka ny fepetra takian'ny boky torolalana.
-tsoratra
Azafady, ataovy ny PPE ilaina, toy ny akanjo laboratoara sy fonon-tanana, mba hiantohana ny fahasalamanao sy ny fiarovana anao.
