Proteinase K NGS (vovoka)
Saka no: HC4507A
NGS Protease K dia protease serine marin-toerana miaraka amin'ny hetsika anzima avo lenta ary manokana ny substrate midadasika.Noho izany, matetika izy io no ampiasaina mba hanimba ny proteinina ho peptides fohy.NGS Protease K dia protease serine mahazatra miaraka amin'ny Asp39Josefa sy Maria69- Ser224triad catalytic izay miavaka amin'ny serine protease, ary ny foibe catalytic dia voahodidin'ny tow Ca.2+toerana mamatotra ho an'ny fanamafisana, mitazona hetsika anzima avo lenta amin'ny toe-javatra midadasika kokoa.
famaritana
| Bika Aman 'endrika | Vovoka amorphous fotsy hatramin'ny fotsy, lyophilized |
| Hetsika manokana | ≥40U/mg mafy |
| DNase | Tsy nisy hita |
| RNase | Tsy nisy hita |
| Bioburden | ≤50CFU/g mafy |
| Ny sisa tavela amin'ny asidra nukleika | <5pg/mg mafy |
Properties
| Source | Album Tritirachium |
| laharana EC | 3.4.21.64(Recombinant avy amin'ny rakikira Tritirachium) |
| lanjan'ny molekiola | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric teboka | 7.81 Fig.1 |
| pH tsara indrindra | 7.0-12.0 (Manao hetsika avo lenta ny rehetra) Fig.2 |
| Temperature tsara indrindra | 65 ℃ Fig.3 |
| pH fahamarinan-toerana | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) Fig.4 |
| Ny fahamarinan-toerana mafana | Ambany 50 ℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| Fitahirizana fahamarinan-toerana | Tehirizina amin'ny 25 ℃ mandritra ny 12 volana Fig.6 |
| Activators | SDS, urea |
| Inhibitors | diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl fluoride |
Fepetra fitahirizana
Tehirizo ny vovoka lyophilized amin'ny -25 ~ -15 ℃ mandritra ny fotoana maharitra lavitra ny hazavana;Aorian'ny fandravana, aliquot amin'ny boky mety ho an'ny fitehirizana fohy amin'ny 2-8 ℃ lavitra ny hazavana na fitehirizana maharitra amin'ny -25 ~ -15 ℃ lavitra ny hazavana.
Fisorohana
Manaova fonon-tanana sy solomaso fiarovana rehefa mampiasa na milanja, ary tehirizo tsara ny rivotra aorian'ny fampiasana.Ity vokatra ity dia mety hiteraka allergie na tsy fahazakana amin'ny hoditra sy fahasosorana lehibe amin'ny maso.Raha sitrana dia mety hiteraka allergie na tsy fahazakana soritr'aretina na dyspnea.Mety hiteraka fahasosorana taovam-pisefoana.
Famaritana vondrona
Ny singa iray amin'ny NGS Protease K dia faritana ho ny habetsahan'ny anzima ilaina amin'ny hydrolyze kaseine ho 1 μmol L-tyrosine amin'ny fepetra famaritana mahazatra.
Fiomanana reagents
| Reagent | mpanamboatra | katalaogy |
| Casein teknikaavy amin’ny ronono omby | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| asidra trichloroacetic | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Sodium acetate | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| asidra acetic | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| levitra | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Sodium carbonate | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-phenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tirosina | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Soso-kevitra: 1% Casein avy amin'ny ronono omby: levona 1g ronono casein amin'ny 50ml ny 0.1M ny sodium phosphate solution, pH 8.0, hafanaina ao anaty rano fandroana amin'ny 65-70 °C mandritra ny 15min, hanaitra sy levona, mangatsiatsiaka amin'ny rano, manitsy ny hydroxide ny sodium amin'ny pH 8.0, ary arotsaka ao anaty 100ml.
Reagent II:
Vahaolana TCA: 0.1M trichloroacetic asidra, 0.2M ny sodium acetate ary 0.3M acetic asidra (lanja 1.64g trichloroacetic asidra + 1.64g ny sodium acetate + 1.724mL acetic asidra nisesy, ampio 50mL deionized rano, hanitsy amin'ny 4HCl 3. 100 ml).
Reagent III:
0.4m ny sodium carbonate solution (lanjaina 4.24g anhydrous sodium carbonate ary levona anaty rano 100ml)
Reagent IV:
Folin phenol reagent: levona in-5 amin'ny rano deionized.
Reagent V:
Enzyme diluent: 0.1 M ny sodium phosphate solution, pH 8.0.
Reagent VI:
L-tyrosine mahazatra vahaolana: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol / ml L-tyrosine levona amin'ny 0,2M HCl.
fitsarana
1. Alefaso ny spectrophotometer UV-Vis ary safidio ny fandrefesana photometric.
2. Apetraho ho 660nm ny halavan'ny onjam-peo.
3. Avereno ny fandroana rano, apetraho amin'ny 37 ℃ ny mari-pana, ataovy azo antoka fa tsy miova ny mari-pana mandritra ny 3-5mins.
4. Afanaina mialoha ny substrate 0.5mL ao anaty fantsona centrifuge 2mL amin'ny fandroana rano 37 ℃ mandritra ny 10mins.
5. Esory ao anaty fantsona centrifuge efa nafanaina mandritra ny 10 minitra ny vahaolana anzima 0,5mL voatsatso.Apetraho ho vondrona banga ny diluent anzima.
6. Ampio 1,0 mL TCA réagent avy hatrany aorian'ny fanehoan-kevitra.Afangaro tsara ary arotsaka ao anaty rano fandroana mandritra ny 30 minitra.
7. Vahaolana fanehoan-kevitra centrifugate.
8. Ampio ireto singa manaraka ireto amin'ny filaharana voatondro.
| Reagent | BOKY FAHA- |
| Supernatant | 0,5 mL |
| Sodium carbonate 0,4M | 2,5 mL |
| Folin phenol reagent | 0,5 mL |
9. Afangaro tsara alohan'ny hidirana anaty rano fandroana 37 ℃ mandritra ny 30 min.
10. OD660nofaritana ho OD1;vondrona fanaraha-maso banga: Ny diluent Enzyme dia ampiasaina hanoloana ny vahaolana anzima hamaritana ny OD660toy ny OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-tyrosine mahazatra curve: 0.5mL samy hafa fifantohana L-tyrosine vahaolana, 2.5mL 0.4M Sodium karbônina, 0.5mL Folin phenol reagent amin'ny 5mL centrifuge fantsona, incubate ao amin'ny 37 ℃ mandritra ny 30mins, mamantatra ny OD660ho an'ny fifantohana samihafa amin'ny L-tyrosine, dia nahazo ny curve mahazatra Y = kX + b, izay Y dia ny fifantohana L-tyrosine, X dia OD600.
Kajy
2: Tontalin'ny habetsahan'ny vahaolana (mL)
0.5: Ny habetsahan'ny vahaolana anzima (mL)
0.5: Ny habetsahan'ny ranon-javatra ampiasaina amin'ny famaritana chromogenic (mL)
10: Fotoana fanehoan-kevitra (min)
Df: Fandotoana maro
C: Fifantohan'ny enzyme (mg/mL)
tarehimarika
Fig.1 ADN sisa
| Santionany | Ave C4 | Asidra nukleika Famerenana (pg/mg) | Famerenana (%) | Total Nucleic asidra ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O tsy misy RNA | Tsy voafaritra | - | - | - |
Fig.2 pH tsara indrindra
Fig.3 Temperature tsara indrindra
Fig.4 pH fahamarinan-toerana
Fig.5 fahamarinan-toerana mafana
Fig.6 Fitahirizana fahamarinan-toerana amin'ny 25 ℃
