Kit Genotyping Mouse

Saka No: HCR2021A

Ity vokatra ity dia kitapo natao hamantarana haingana ny karazana totozy, anisan'izany ny fitrandrahana ADN sy ny rafitra fanamafisam-peo PCR.Ny vokatra dia azo ampiasaina amin'ny fanamafisam-peo PCR mivantana avy amin'ny rambony totozy, sofina, rantsan-tongony ary tavy hafa aorian'ny fisarahana tsotra nataon'i Lysis Buffer sy Proteinase k.Tsy misy fandevonan-kanina mandritra ny alina, fitrandrahana phenol-chloroform na fanadiovana tsanganana, izay tsotra ary manafohy ny fotoana mandany ny andrana.Ny vokatra dia mety amin'ny fampitomboana ny sombintsombin'ny kendrena hatramin'ny 2kb sy ny fanehoan-kevitra PCR multiplex miaraka amin'ny primer 3 tsiroaroa.Ny 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix dia misy ADN polymerase, Mg²⁺, dNTPs ary rafitra buffer optimized mba hanomezana fahombiazana avo lenta sy fandeferana amin'ny inhibitor, mba hahafahan'ny PCR fanehoan-kevitra amin'ny alàlan'ny fampidirana môdely sy primer ary mamerina ny vokatra ho 1 ×.Ny vokatra PCR nohamafisina tamin'ity vokatra ity dia manana fototra “A” misongadina eo amin'ny faran'ny 3′ ary azo ampiasaina mivantana amin'ny kloning TA aorian'ny fanadiovana.

singa

Fepetra fitahirizana

Ny vokatra dia tokony hotehirizina amin'ny -25 ~ -15 ℃ mandritra ny 2 taona.Aorian'ny famafazana, ny Lysis Buffer dia azo tehirizina amin'ny 2 ~ 8 ℃ ho an'ny fampiasana maro mandritra ny fotoana fohy, ary afangaro tsara rehefa ampiasaina.

Fampiharana

Ity vokatra ity dia mety amin'ny famakafakana ny totozy knockout, transgenic detection, genotyping sy ny sisa.

Toetoetra

1.Fampandehanana tsotra: tsy mila manala ny ADN genomika;

2.Fampiharana malalaka: mety amin'ny fanamafisana mivantana ny tavy totozy isan-karazany.

torolalana

1.Famoahana ny ADN génomika

1) Fanomanana ny lysate

Ny lysate tissue dia voaomana araka ny isan'ny santionan'ny totozy ho lysed (lysate tissue dia tokony homanina eny an-toerana araka ny fatrany ary afangaro tsara ho ampiasaina), ary ny ampahany amin'ny reagents ilaina amin'ny santionany iray dia toy izao manaraka izao:

2) Fanomanana santionany sy Lysis

Fampiasana Tissue Recommended

Makà santionany amin'ny tadin'ny totozy amin'ny fantsona centrifuge madio, ampio 200μL ny lysate sela vaovao isaky ny fantsona centrifuge, vortex ary mihozongozona, avy eo incubate amin'ny 55 ℃ mandritra ny 30mins, ary avy eo hafanaina amin'ny 98 ℃ mandritra ny 3mins.

3) centrifugation

Atsofohy tsara ny lysate ary centrifuge amin'ny 12.000 rpm mandritra ny 5 minitra.Ny supernatant dia azo ampiasaina ho modely amin'ny fanamafisana ny PCR.Raha ilaina ny môdely amin'ny fitahirizana, dia afindrao amin'ny fantsona centrifuge sterile hafa ny supernatant ary tehirizo amin'ny -20 ℃ mandritra ny 2 herinandro.

2.PCR Amplification

Esory ny 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix avy amin'ny -20 ℃ ary atsofohy amin'ny ranomandry, afangaro ambony ambany ary omano ny rafitra fanehoan-kevitra PCR araka ny tabilao manaraka (miasa amin'ny ranomandry):

Fanamarihana:

a) Ny vola fanampiny dia tsy tokony hihoatra ny 1/10 amin'ny rafitra, ary raha be loatra ny fanampiny dia mety ho voasakana ny fanamafisam-peo PCR.

Fepetra PCR soso-kevitra

Fanamarihana:

a) Ny mari-pana fanalefahana: Raha jerena ny sandan'ny Tm an'ny primer, dia soso-kevitra ny hametraka ny mari-pana annealing amin'ny sanda Tm kely kokoa amin'ny primer +3 ~ 5 ℃.

Olana sy Vahaolana iraisana

1.Tsy misy tsipika nokendrena

1) vokatra lysis tafahoatra.Fidio ny habetsaky ny môdely mety indrindra, matetika tsy mihoatra ny 1/10 amin'ny rafitra;

2) Be loatra ny haben'ny santionany.Alefaso in-10 ny lysate ary ampitomboy, na ahena ny haben'ny santionany ary avereno indray;

3) Tsy vaovao ny santionan'ny tissue.Aroso ny mampiasa santionany tavy vaovao;

4) Ratsy kalitao primer.Mampiasà ADN génomika hanamafisana mba hanamarinana ny kalitao voalohany sy hanatsara ny famolavolana primer.

2.Fanamafisana tsy voafaritra

1) Ny mari-pana annealing dia ambany loatra ary ny isan'ny tsingerina dia avo loatra.Ampitomboy ny mari-pana annealing ary ahena ny isan'ny tsingerina;

2) Avo loatra ny fifantohana modely.Ahena ny habetsaky ny môdely na manalefaka ny môdely in-10 aorian'ny fanamafisana;

3) Ny tsy fahampian'ny primer manokana.Optimize ny famolavolana primer.

-tsoratra

1.Mba hisorohana ny fandotoana hazon-damosina eo amin'ny santionany, dia tokony homanina ny fitaovana fanaovana santionany maro, ary azo diovina amin'ny vahaolana 2% sodium hypochlorite na mpanadio asidra nokleika ny velaran'ny fitaovana raha ilaina ny fampiasana miverimberina.

2.Aroso ny mampiasa tavy totozy vaovao, ary tsy tokony ho lehibe loatra ny habetsahan'ny santionany mba tsy hisy fiantraikany amin'ny valin'ny fanamafisana.

3.Ny Lysis Buffer dia tokony hialana amin'ny fangatsiahana matetika, ary azo tehirizina ao amin'ny 2 ~ 8 ℃ ho an'ny fampiasana maromaro fohy.Raha voatahiry amin'ny hafanana ambany, dia mety hisy ny rotsak'orana, ary tsy maintsy levona tanteraka alohan'ny hampiasana azy.

4.Ny PCR Mix dia tokony hialana amin'ny fangatsiahana matetika, ary azo tehirizina amin'ny 4 ℃ ho an'ny fampiasana miverimberina fohy.

5.Ity vokatra ity dia natao ho an'ny fikarohana andrana ara-tsiansa ihany ary tsy tokony hampiasaina amin'ny fitiliana klinika na fitsaboana.