Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase dia polymerase ADN thermostable avy amin'ny Thermus aquaticus YT-1, izay manana hetsika polymerase 5′→3′ ary hetsika endonuclease 5′ flap.
singa
| singa fototra | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5 × 200 mL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 5 × 10 mL |
Toetra fitahirizana
Fitaterana eo ambanin'ny 0 ° C ary tehirizina amin'ny -25 ° C ~ -15 ° C.
Famaritana vondrona
Ny singa iray dia voafaritra ho ny habetsahan'ny anzima izay mampiditra 15 nmol dNTP ho akora tsy mety levona asidra ao anatin'ny 30 minitra amin'ny 75 ° C.
Fanaraha-maso kalitao
1.Fandinihana ny fahadiovan'ny proteinina (SDS-PAGE):Ny fahadiovan'ny Taq DNA polymerase dia ≥95% nofaritana tamin'ny fanadihadiana SDS-PAGE.
2.Endhetsika onuclease:Ny farafahakeliny 5 U amin'ny Taq DNA polymerase miaraka amin'ny 1 μg λDNA mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka ny voafaritra.
3.Exonuclease Activity:Ny farafahakeliny 5 U amin'ny Taq DNA polymerase miaraka amin'ny 1 μg λ -Hind Ⅲ dia mandevona ADN mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka ny voafaritra.
4.Nickase Activity:Ny farafahakeliny 5 U amin'ny Taq DNA polymerase miaraka amin'ny 1 μg pBR322 ADN mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ° C dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka izay voafaritra.
5.RNase Activity:Ny farafahakeliny 5 U amin'ny Taq DNA polymerase miaraka amin'ny 1.6 μg MS2 RNA mandritra ny 16 ora amin'ny 37 ° C dia tsy miteraka fahasimbana azo tsapain-tanana araka izay voafaritra.
6.E. coliADN:5 U amin'ny Taq DNA polymerase dia voasivana amin'ny fisian'ny ADN génomika E. coli amin'ny fampiasana TaqMan qPCR miaraka amin'ny primer manokana ho an'ny E. coli 16S rRNA locus.Ny fandotoana ADN génomika E. coli dia ≤1 Kopia.
7.Fanamafisana PCR (5.0 kb ADN Lambda)- Ny fanehoan-kevitra 50 µL misy ADN 5 ng Lambda miaraka amin'ny Taq DNA Polymerase 5 ho an'ny tsingerina 25 amin'ny amplification PCR dia miteraka vokatra 5.0 kb andrasana.
Fametrahana fanehoan-kevitra
| singa | BOKY FAHA- |
| ADN templatea | tsy voatery |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM tsirairay avy) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseamin ' | 0,25 μL |
| Rano tsy misy nokleary | Hatramin'ny 50 μL |
Fanamarihana:
1) Tsy mitovy ny fifantohana tsara indrindra amin'ny modely samihafa.Ity tabilao manaraka ity dia mampiseho ny fampiasana môdely soso-kevitra amin'ny rafitra fanehoan-kevitra 50 µL.
| ADN | vola |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid na Viral | 1 pg-1 ng |
2) Ny fifantohana tsara indrindra amin'ny Taq DNA Polymerase dia mety manomboka amin'ny 0.25 µL~1 µL amin'ny fampiharana manokana.
fanehoan-kevitraFANDAHARAM-POTOANA
| Dingana | hafanana(°C) | Time | tsingerina |
| Denaturation voalohanya | 95 ℃ | 5 mn | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 tsingerina |
| Fanafodyamin ' | 60 ℃ | 15 s | |
| Fanitarana | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Fanitarana farany | 72 ℃ | 5 mn | - |
Fanamarihana:
1) Ny fepetra denaturation voalohany dia mety amin'ny ankamaroan'ny fanehoan-kevitra amplification ary azo ovaina araka ny fahasarotan'ny firafitry ny môdely.Raha sarotra ny firafitry ny môdely, ny fotoana alohan'ny denaturation dia azo itarina hatramin'ny 5 - 10mins mba hanatsarana ny vokatry ny denaturation voalohany.
2) Ny mari-pana annealing dia mila amboarina araka ny sandan'ny Tm amin'ny primer, izay amin'ny ankapobeny dia napetraka amin'ny 3 ~ 5 ℃ ambany noho ny sanda Tm amin'ny primer;Ho an'ny maodely sarotra dia ilaina ny manitsy ny mari-pana amin'ny annealing ary manitatra ny fotoana fanitarana mba hahazoana fanamafisana mahomby.
