2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Ampahany : HCB5151A
Ny SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) dia natao hanao PCR mivantana avy amin'ny santionany tsy misy fitrandrahana ADN na fanomanana santionany.Ity reagent ity dia misy ny ADN polymerase mafana, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (miaraka amin'ny dUTP fa tsy dTTP), ary stabiliser, ho an'ny PCR quantitative (qPCR).Ity reagent ity dia miteraka fandeferana avo lenta, ary noho izany dia azo ampiharina mivantana amin'ny fitadiavana santionany toy ny swab tenda, rora, ra manontolo manohitra ny coagulated, plasma ary serum tsy misy fitrandrahana ADN.Ny reagent dia mampiasa buffer proprietary ho an'ny qPCR miaraka amin'ny anzima mifangaro amin'ny polymerase ADN manohitra ny inhibitory sy ny enzyme UNG.Noho izany dia afaka mahazo fanamafisana tsara ny fototarazo kendrena ao amin'ny santionany misy inhibitors ary manakana ny fampitomboana tsara diso vokatry ny PCR sisa tavela sy ny fandotoana aerosol.Ity reagent ity dia mifanaraka amin'ny ankamaroan'ny fitaovana PCR fluorescent quantitative, toy ny Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche sy ny sisa.
singa
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Fepetra fitahirizana
Ny singa rehetra dia tokony hotehirizina amin'ny -20 ℃ ho fitahirizana maharitra ary 4 ℃ hatramin'ny 3 volana.Mba afangaro tsara aorian'ny fandoroana sy ny centrifuge alohan'ny hampiasana azy.Fadio ny fanala matetika.
Protocol amin'ny bisikileta
| Dingana | hafanana | Time | tsingerin'ny |
| Fandevonan-kanina | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Fampahavitrihana polymerase | 95 ℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Fanitarana / fanitarana | 56-64 ℃ | 20-60s |
Torolàlana momba ny pipet
| Reagent | Volume isaky ny fanehoan-kevitra | Volume isaky ny fanehoan-kevitra | Fifantohana farany |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0,5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Santionany3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Volume total | 25 μL | 50 μL | - |
1. Ny fifantohana farany amin'ny primer dia matetika 0.2μM.Ho an'ny vokatra tsara kokoa, ny fifantohana voalohany dia azo atao tsara ao anatin'ny 0.2-1μM.
2. Amin'ny ankapobeny, ny fifantohan'ny probe dia azo atao tsara ao anatin'ny 0.1-0.3μM.Ny fifantohana tsara indrindra amin'ny probe dia mifandraika amin'ny fitaovana fanamafisam-peo PCR amin'ny fotoana tena izy, ny karazana probe ary ny karazana fanamafisam-peo fluorescent.Azafady, jereo ny boky torolalana momba ny fitaovana na ny fepetra manokana ho an'ny probe fluorescent tsirairay.
3. Ny karazana santionany isan-karazany dia misy karazana sy votoatin'ny inhibitor ary laharan'ny fototarazo kendrena.Ny habetsaky ny santionany dia tokony hojerena amin'ny toe-javatra tena izy.Manaova dilution ny santionany amin'ny fampidirana rano tsy misy nuclease na TE Buffer, raha ilaina.
4. Recommended volume santionany samy hafa:
| Santionany | Volume ho an'ny iray 50 μL fanehoan-kevitra | Faratampony ISAKY NY |
| Anticoagulated ra manontolo | 2,5 μl | 5% |
| ranon-dra | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Tenda fikapohana | 10 μL | 20% |
| rora | 10 μL | 20% |
Fanaraha-maso kalitao
1. Famantarana ny fiasa: fahatsapan-tena, fahasamihafàna ary famerenana ny qPCR.
2. Tsy misy hetsika exogenous nuclease: tsy misy exogenous endonuclease sy exonuclease loto.
Fanamarihana momba ny vokatra
1. Ity vokatra ity dia mampiasa karazana ADN polymerase mafana, izay azo ampiasaina ao anatin'ny 1-5 minitra. Koa satria ny buffer fanehoan-kevitra dia efa optimized, dia mety kokoa amin'ny PCR avo roa heny na maromaro fluorescence amin'ny alàlan'ny fomba fanadihadiana.
2. Raha ambany loatra ny sandan'ny Rn amin'ny fanamafisam-peo PCR na miharihary fa voasakana ny fanamafisana, ny fampihenana ny habetsaky ny santionany, ny fampitomboana ny habetsaky ny fanehoan-kevitra na ny fandotoana ny santionany teo aloha dia mety hanatsara ny vokatra.
3. Ny fanangonana ra, rora, urine, swab tenda, sns dia tokony hanaraka ny fepetra takian'ny klinika, ary ny santionany vaovao dia azo ampiasaina mba hisorohana ny fahasimban'ny asidra nokleika.
4. Koa satria ny amplicons samy hafa dia manana fahombiazan'ny fampiasana amin'ny dUTP sy ny fahatsapana ho an'ny UNG, ny reagents dia tokony hotsaraina raha mihena ny fahatsapana rehefa mampiasa ny rafitra UNG.Mifandraisa aminay mba hahazoana fanohanana ara-teknika raha ilaina.
5. Mba hisorohana ny fanamafisan'ny vokatra PCR mitondra entana eo anelanelan'ny fanehoan-kevitra dingana iray, dia ilaina ny faritra andrana manokana sy ny pipette mba hanamafisana.Miasa amin'ny fonon-tanana ary miova matetika ary aza sokafy ny fantsona fanehoan-kevitra aorian'ny fanamafisana ny PCR.
