UDG/UNG Enzymes
Ny UDG (uracil DNA glycosylase) dia afaka mampiakatra ny hydrolysis ny rohy N-glycosidic eo anelanelan'ny fototra uracil sy ny hazondamosina siramamy-phosphate ao amin'ny ssDNA sy dsDNA.Afaka mifehy mora foana ny fandotoana aerosol ary mety amin'ny rafitra biolojia molekiola mahazatra toy ny PCR, qPCR, RT-qPCR ary LAMP.
fepetra arahana
| Expression Host | Recombinant E. coliwith uracil ADN glycosylase fototarazo |
| Lanja molekiola | 24. 8kDa |
| fahadiovana | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Hafanainactivation | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Famaritana vondrona | Ny singa iray (U) dia faritana ho ny habetsahan'ny anzima ilaina mba hanamafisana ny hydrolysis ny l μg dU misy dsDNA ao anatin'ny 30 minitra amin'ny 25 ℃. |
fitahirizana
Ny vokatra dia tokony hotehirizina amin'ny -25 ℃ ~ -15 ° C mandritra ny roa taona.
torolalana
1.Fanomanana ny fangaro fanehoan-kevitra PCR araka ny rafitra manaraka
| singa | Vola (μL) | fifantohana farany |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/leach |
| ADN template | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Hatramin'ny 50 | - |
Fanamarihana: Araka ny fepetra andrana, ny fifantohana farany amin'ny dUTP dia azo amboarina eo anelanelan'ny 0.2-0.6 mmol/L, ary ny 0.2 mmol/L dTTP dia azo ampiana mifantina.
2.Fomba fanamafisam-peo
| Dingana tsingerina | hafanana | Time | tsingerina |
| fanimbana môdely misy dU | 25 ℃ | 10 mn | 1 |
| Fampahavitrihana UDG, denaturation voalohany modely | 95 ℃ | 5~10 mn | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10 seg |
30-35 |
| Fanafody | 60 ℃ | 20 seg | |
| Fanitarana | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| Fanitarana farany | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Fanamarihana: Ny fotoana fanehoan-kevitra amin'ny 25 ° C dia azo amboarina ao anatin'ny 5-10mins araka ny fepetra andrana.
-tsoratra
1.Ny UDG dia mavitrika amin'ny ankamaroan'ny buffer fanehoan-kevitra PCR.
2.Ny enzymes dia tokony hotehirizina ao anaty boaty gilasy na amin'ny fandroana ranomandry rehefa ampiasaina, ary tokony hotehirizina amin'ny -20 ° C avy hatrany aorian'ny fampiasana.
3.Azafady, ataovy ny PPE ilaina, akanjo laboratoara sy fonon-tanana, mba hiantohana ny fahasalamanao sy ny fiarovana anao!
