Kit Mini Extraction ADN

Fepetra fitahirizana

Tehirizo ao amin'ny -15 ~ -25 ℃ ary fitaterana amin'ny mari-pana.

singa

Fiarovana GDP:ADN binding buffer.

Buffer GW:Fanasana buffer;ampio ethanol tanteraka amin'ny habetsahana voalaza eo amin'ny tavoahangy alohan'ny hampiasana azy.

Elution buffer:Elution.

FastPure ADN Mini Columns-G:Andry adsorption ADN.

Tube fanangonana 2 ml:Fantsona fanangonana ho an'ny filtrate.

Fitaovana voaomana

1.5 ml sterilized fantsona, ethanol tanteraka sy isopropanol (rehefa sombiny ADN ≤100 bp, ampio boky 1

isopropanol amin'ny gel volume 1), fandroana rano.

Dingana andrana

Ampio ethanol 80 ml mba hanalefahana ny Buffer GW araka ny voalaza eo amin'ny marika alohan'ny hampiasana azy, tehirizo amin'ny mari-pana.

rafitra

1. Vahaolana fanehoan-kevitra PCR

Tetika fitrandrahana gel: Manampia volavolan-dalàna mitovy amin'ny Buffer GDP PCR fikajiana fanarenana vahaolana:Ampio in-5 ny volume Buffer

2. GDP Kajy ny habetsahan'ny gel(100  μl mitovy amin'ny 100 mg)

Esory ny gel

3. Afanaina mialoha amin'ny 50 ~ 55℃

4. Manasa Mamatotra

Ampio 300 μL ny Buffer GDP*

Ampio 700 μL ny Buffer GW

Ampio 700 μL ny Buffer GW

5. Elute

Ampio 20 - 30μL ny Elution Buffer na rano deionized

Fanamarihana* Famerenana ny fluid reaction PCR tsy misy an'ity dingana ity

Programa fitrandrahana gel

1. Aorian'ny electrophoresis ADN ho an'ny fizarazarana ny sombintsombiny ADN, esory ny tsipika tokana amin'ny sombiny ADN avy amin'ny gel agarose eo ambanin'ny hazavana UV.Amporisihina ny mampiasa taratasy misoroka mba hisintonana ny hamandoana hita maso amin'ny gel ary hampihena ny haben'ny silaka gel amin'ny fanesorana agarose fanampiny araka izay azonao atao.Lanjalanjao ny silaka gel (tsy misy fantsona microcentrifuge) mba hanaovana kajy ny habeny: Manodidina ny 100 μL eo ho eo ny habetsaky ny gelslice 100 mg, raha heverina fa 1g/ml ny hakitroky.

2. Ampio ny habetsaky ny Buffer GDP mitovy, incubate amin'ny 50 ~ 55 ℃ mandritra ny 7-10 min (araka ny haben'ny gel, amboary ny fotoana fikojakojana mandra-pahalevon'ny gel).Avereno in-2 ny fantsona mandritra ny incubation.

Δ Ny fanampim-bokatra 1-3 an'ny Buffer GDP dia tsy hisy fiantraikany amin'ny fahombiazan'ny fanarenana ADN.Raha ny sombiny ADN ho sitrana <100 bp, 3 boky ny Buffer GDP mila ampiana;rehefa levona tanteraka ilay silaka gel dia asiana volume isopropanol 1 ary afangaro tsara dia tohizo amin'ny dingana manaraka.

3. Centrifuge vetivety mba hitondrana ny santionany ho any amin'ny farany ambany ny fantsona, ampidiro ny FastPure ADN Mini Columns-G ao amin'ny Collection Tubes 2 ml, tsara mamindra ny vahaolana maximally ny 700 μL indray mandeha a

fotoana mankany amin'ny tsanganana filtration, centrifuge amin'ny 12,000 rpm (13,800 X g) mandritra ny 30-60 sec.

4. Esory ny filtrate ary ampio 300 μL ny Buffer GDP amin'ny tsanganana, atsangano amin'ny mari-pana amin'ny efitrano mandritra ny 1 minitra, centrifuge amin'ny 12,000 rpm (13,800 X g) mandritra ny 30-60 sec.

5. Esory ny filtrate ary ampio 700 μL ny Buffer GW (jereo raha efa nampiana ethanol absolute mialoha!) ny tsanganana, centrifuge amin'ny 12.000 rpm (13.800 X g) mandritra ny 30-60 sec.

Δ Azafady, ampio ny Buffer GW manodidina ny rindrin'ny tsanganana adsorption, na ampio ny fonon'ny Buffer GW ary afangaro in-2 - in-3 izy io mba hanampy amin'ny fanesorana tanteraka ny sira miraikitra amin'ny rindrin'ny fantsona.

6. Avereno ny dingana 5.

Δ Ny famafazana miaraka amin'ny Buffer GW indroa dia afaka miantoka fa ny sira dia nesorina tanteraka ary manafoana ny fiantraikany amin'ny fanandramana manaraka.

7. Ario ny sivana ary atsipazo ny tsanganana tsy misy na inona na inona amin'ny 12.000 rpm (13.800 X g) mandritra ny 2 min.

8. Ampidiro ao anaty tavoahangy microcentrifuge 1,5 ml ny tsanganana, ampio 20 - 30 μL Elution Buffer eo afovoan'ny fonon'ny tsanganana, atsangano mandritra ny 2 minitra, ary avy eo centrifuge amin'ny 12,000 rpm (13,800 X g) mandritra ny 1 min.Ario ny tsanganana, tehirizo ny ADN azo amin'ny -20.

Δ Famindrana ny supernatant amin'ny dingana 8 mankany amin'ny tsanganana mba hamerenana indray ary ny fanafanana mialoha ny Elution Buffer ho 55 (rehefa ny sombiny ADN> 3 kb) dia mety hanampy amin'ny fampitomboana ny fahombiazan'ny fanarenana.

Programa fanarenana ny vokatra PCR

Ity protocole ity dia azo ampiharina amin'ny fanadiovana ny sombintsombin'ny ADN avy amin'ny vokatra PCR, ny rafitry ny fanehoan-kevitra enzymatic ary ny vokatra tsy misy dikany ADN (anisan'izany ny ADN génétique).Ity vahaolana ity dia afaka manala amin'ny fomba mahomby ny nucleotides isan-karazany, ny primer, ny dimer primer, ny molekiola sira, ny enzymes ary ny loto hafa.

1. Apetaho fohifohy ny vokatra PCR, vahaolana amin'ny fanehoan-kevitra enzymatic, ary vokatra hafa amin'ny ADN.Tombanana amin'ny pipette ny habetsahan'izy ireo ary afindra amin'ny fantsona 1,5 ml na 2 ml sterilized.Ampio ddH2O mandra-pahatongan'ny volume hatramin'ny 100 μL;fa ho an'ny ADN génomika manana fifantohana avo dia hanampy amin'ny fanatsarana ny fahombiazan'ny fanarenana ny fanondrahana amin'ny 300 μL amin'ny ddH2O.

2. Ampio 5 volume ny Buffer GDP, afangaro tsara amin'ny alalan'ny inverting na vortexing.Raha ny ADN fragment of interest> 100 bp, dia mila ampiana ethanol 1.5 fanampiny (samples + Buffer GDP).

3. Ampidiro ao amin'ny fantsona fanangonana indray ny tsanganana, afindrao amin'ny tsanganana ny mixtrue, centrifuge amin'ny 12,000 rpm (13,800 ×g) mandritra ny 30 - 60 sec.Raha> 700 µL ny habetsahan'ny vahaolana mifangaro dia avereno ao anaty fantsona fanangonana ny tsanganana adsorption, afindrao amin'ny tsanganana adsorption ny vahaolana sisa tavela, ary centrifuge amin'ny 12,000 rpm (13,800 × g) mandritra ny 30 - 60 segondra.

4. Ny fampisehoana manaraka dia manondro ny dingana 5 - 8 amin'ny 08- 1/Gel extraction program.