Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (fanovana Antibody) dia polymerase ADN thermostable mafana manomboka amin'ny Thermus aquaticus YT-1, izay manana hetsika polymerase 5′→3′ ary hetsika endonuclease 5′ flap.Ny polymerase Taq ADN mafana dia polymerase ADN Taq izay novain'ny antibody Taq thermolabile.Ny fiovan'ny antibody dia nampitombo ny maha-tokana, ny fahatsapana ary ny vokatra PCR.
singa
| singa fototra | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 mL | 5 × 400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody novaina) (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 10 × 5 mL |
Applications
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 amin'ny 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ary 50% Glycerol.
Toetra fitahirizana
Fitaterana eo ambanin'ny 0 ° C ary tehirizina amin'ny -25 ° C ~ -15 ° C.
Famaritana vondrona
Ny singa iray dia voafaritra ho ny habetsahan'ny anzima izay mampiditra 15 nmol dNTP ho akora tsy mety levona asidra ao anatin'ny 30 minitra amin'ny 75 ° C.
Fanaraha-maso kalitao
1.Endhetsika onuclease:Ny fampidirana anzima 20 U miaraka amin'ny ADN 4 μg pUC19 mandritra ny 4 ora amin'ny 37 ℃ dia tsy nahitana fahasimbana azo tsapain-tanana ny ADN araka ny famaritana ny gel electrophoresis.
2.5 kb Lambda PCR:25 tsingerin'ny PCR amplification ny 5 ng Lambda ADN miaraka amin'ny 1.25 units ny Taq DNA Polymerase amin'ny fisian'ny 200 µM dNTPs sy 0.2 µM primer dia miteraka vokatra 5 kb andrasana.
3.Exonuclease Activity:Ny fikorianan'ny fanehoan-kevitra 50 µl misy 12,5 U farafahakeliny amin'ny Taq DNA Polymerase miaraka amin'ny 10 nmol 5'-FAM oligonucleotide mandritra ny 30 minitra amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana hita maso.
4.RNase Activity:Ny fampidirana 10 µL fanehoan-kevitra misy 20 U anzima miaraka amin'ny 1μg ny transcript RNA mandritra ny 2 ora amin'ny 37 ° C dia tsy nahitana fahasimbana azo tsapain-tanana ny ARN araka ny famaritana ny gel electrophoresis.
5.Fanafoanana ny hafanana:Tsia.
Reaction System
| singa | BOKY FAHA- |
| ADN templatea | tsy voatery |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP Mix (10mM tsirairay avy) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseamin '(5U/μL) | 0,125 μL |
| Rano tsy misy nokleary | Hatramin'ny 25 μL |
Fanamarihana:
1) a.
| ADN | vola |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid na Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Ny fifantohana tsara indrindra amin'ny Taq DNA Polymerase dia mety manomboka amin'ny 5-50 units/mL (0.1-0.5 units/25 µL reaction) amin'ny fampiharana manokana.
Thermal cycling protocole
PCR
| Dingana | hafanana(°C) | Time | tsingerina |
| Denaturation voalohanya | 95 ℃ | 1-3min | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 tsingerina |
| Fanafodyamin ' | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Fanitarana | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Fanitarana farany | 68 ℃ | 5 mn | - |
Fanamarihana:
1) Ny denaturation voalohany 1 min amin'ny 95 ° C dia ampy ho an'ny ankamaroan'ny fanamafisana.Ho an'ny maodely sarotra, ny denaturation lava kokoa 2-3mins amin'ny 95 ° C no soso-kevitra.Miaraka amin'ny colony PCR, 5mins denaturation voalohany amin'ny 95 ° C no soso-kevitra.
2) Ny dingana annealing dia matetika 15-60 s.Ny mari-pana fanalefahana dia mifototra amin'ny Tm amin'ny mpivady voalohany ary matetika 45-68 ℃.
