Rnase Inhibitor
Murine RNase inhibitor dia recombinant murine RNase inhibitor naseho sy nodiovina tamin'ny E.coli.Izy io dia mifatotra amin'ny RNase A, B na C amin'ny tahan'ny 1: 1 amin'ny alàlan'ny fatorana tsy covalent, ka manakana ny asan'ny enzymes telo ary miaro ny ARN amin'ny fahasimbana.Na izany aza, tsy mahomby amin'ny RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H na RNase avy amin'ny Aspergillus.Ny inhibitor Murine RNase dia nosedraina tamin'ny RT-PCR, RT-qPCR ary IVT mRNA, ary nifanaraka tamin'ny transcriptase Reverse ara-barotra isan-karazany, polymerase ADN ary polymerase RNA.
Raha ampitahaina amin'ny inhibitors RNase olombelona, ny inhibitor RNase murine dia tsy misy cysteinees roa izay tena saro-pady amin'ny oxidation izay mahatonga ny inactivation ny inhibitor.Izany no mahatonga azy tsy hiorina amin'ny DTT ambany (latsaky ny 1 mM).Ity endri-javatra ity dia mahatonga azy io ho mety amin'ny fampiasana amin'ny fanehoan-kevitra izay misy DTT avo lenta izay manimba ny fanehoan-kevitra (oh: RT-PCR Real-time).
Application
Ity vokatra ity dia azo ampiasaina betsaka amin'ny fanandramana rehetra izay ahafahan'ny fitsabahan'ny RNase hisorohana ny fahasimban'ny RNA, toy ny:
1.Synthesis ny tady voalohany amin'ny cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, sns.
2.Miaro ny ARN amin'ny fahapotehana mandritra ny transcription/translate in vitro (oh: rafitra replication vitro in vitro).
3.Ny fanakanana ny hetsika RNase mandritra ny fisarahana sy ny fanadiovana RNA.
Fepetra fitahirizana
Ny vokatra dia azo tehirizina amin'ny -25～- 15 ℃, manan-kery mandritra ny 2 taona.
fitahirizana buffer
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ary glycerol 50%.
Famaritana vondrona
Ny habetsahan'ny murine RNase inhibitor ilaina hanakanana ny asan'ny 5ng of ribonuclease A amin'ny 50% dia voafaritra ho singa iray (U).
lanjan'ny molekiola proteinina
Ny lanjan'ny molekiolan'ny murine RNase inhibitor dia 50 kDa.
Fanaraha-maso ny kalitao
Exonuclease hetsika:
40 U amin'ny murine RNase inhibitor miaraka amin'ny 1 μg λ -Hind III dia mandevona ADN amin'ny 37 ℃ mandritra ny 16 ora dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
Hetsika endonuclease:
40 U amin'ny murine RNase inhibitor amin'ny 1μg λ ADN amin'ny 37 ℃ mandritra ny 16 ora dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
Nicking hetsika:
40U ny murine RNase inhibitor miaraka amin'ny 1μg pBR322 amin'ny 37 ℃ mandritra ny 16 ora dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
RNase asa:
40U amin'ny murine RNase inhibitor miaraka amin'ny 1.6μg MS2 RNA mandritra ny 4h amin'ny 37 ℃ dia tsy miteraka fahasimbana araka ny famaritana ny electrophoresis gel agarose.
E.ADN coli:
40 U amin'ny murine RNase inhibitor dia nojerena ny fisian'ny E. coli genomic ADN mampiasa TaqMan qPCR miaraka amin'ny primers manokana ho an'ny E. coli 16S rRNA locus.Ny fandotoana ADN génomika E. coli dia ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1. Ny fihetsehana mahery vaika na ny fihetsehana dia hitarika amin'ny tsy fihetsehana anzima.
2. Ny mari-pana tsara indrindra amin'ity inhibitor ity dia 25-55 ℃, ary tsy mavitrika amin'ny 65 ℃ sy ambony.
3. Ny asan'ny RNase H, RNase 1 ary RNase T1 dia tsy nosakanan'ny murine RNase inhibitor.
4. Ny fanakanana ny asan'ny RNase dia hita amin'ny pH isan-karazany (pH 5-9 dia mavitrika avokoa), ary ny hetsika ambony indrindra dia hita amin'ny pH 7-8.
5. Koa satria ny ribonucleases matetika dia mitazona ny asa ao anatin'ny fepetra denaturation, dia tsy maintsy atao ny fitandremana mba hisorohana ny fanimbana ny molekiolan'ny RNase Inhibitor izay mikorontana amin'ny ribonuclease.Mba hisorohana ny famotsorana ny ribonuclease mavitrika dia tokony hialana ny mari-pana mihoatra ny 50 ° C sy ny fatran'ny urea na ny denaturing hafa.
